翁思颖柴可夫

    1 浙江中医药大学基础医学院 浙江 杭州 310053

    2 浙江省宁波市中医院 浙江 宁波 315000

    糖尿病肾病(DN)是一种严重的糖尿病微血管并发症，是导致终末期肾病的重要原因之一。高糖所致的慢性炎症可引发肾间质纤维化，是DN早期肾损伤病理改变之一。在其纤维化过程中，可出现上皮细胞标志E-钙黏蛋白(E-Cadherin)丢失、间充质细胞标志α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子-β1(TGF-β1)增加[1-2]。本团队前期研究[3]运用益气养阴活血汤治疗DN大鼠，发现该方可下调大鼠肾组织NF-κB及MCP-1表达。为进一步探讨其保护肾脏的作用机制，本研究建立DN大鼠模型，以观察益气养阴活血汤对DN大鼠肾组织TNF-α及TGF-β1、α-SMA、E-Cadherin表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：8周龄雄性SD大鼠54只，SPF级，体重220～240g，由上海斯莱克实验动物有限公司提供，饲养于浙江中医药大学动物实验研究中心。实验动物按3R原则给予人道关怀，经浙江中医药大学动物实验中心伦理委员会审核批准通过。

    1.2 实验药物：益气养阴活血汤组成：生黄芪、女贞子、葛根各30g，丹参20g，制大黄5g。全方药材由浙江省中药研究所制剂室提供，全部药材粉碎后加5倍水煎煮1h/次，合并2次滤液，调整PH值至7，浓缩定容至生药含量2g/ml，微孔滤膜过滤除菌，分装后4℃保存。

    1.3 主要试剂及仪器：总蛋白提取试剂盒购于Thermo，一抗兔抗大鼠TNF-α抗体、TGF-β1抗体、α-SMA抗体、E-Cadherin抗体均购于Abcam，二抗羊大鼠IgG抗体购于Thermo，脱水机(Thermo)，石蜡切片机、染色机、封片机(LEICA)，光镜(OlymPus)。

    1.4 造模与分组方法：参照文献[4]建立DN大鼠模型，选取46只大鼠为造模组，禁食不禁水12h后，一次性腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液45mg/kg。选8只正常大鼠设正常对照组(NC)，腹腔注射等量柠檬酸钠缓冲液。两组均予普通饲料喂养2周。2周后造模组大鼠禁食不禁水10h，筛选24只空腹血糖值在22±8mmol/L和尿总蛋白排泄率在50μg/min以上的大鼠为DN模型大鼠 ......