宋晶晶 王 海

    浙江省立同德医院 浙江 杭州 310012

    宫颈癌在女性群体中是发病率很高的妇科肿瘤，手术和化疗目前仍是治疗宫颈癌的主要手段[1-2]。本研究主要探讨天然药物川楝素是否对顺铂诱导的凋亡有协同作用并研究其机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料：顺铂、噻唑蓝(MTT)、二甲亚砜(DMSO)和Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(货号：APOAF)购于德国Sigma-Al dr ich公司。川楝素购于南京春秋生物工程有限公司。DMEM培养基购于美国Gibco公司。细胞蛋白提取液、JC-1线粒体膜电位染料和线粒体分离试剂盒(批号：C3601)购于江苏碧云天。c-Jun、Bcl-xl、caspase-9、caspase-3和β-act in抗体购于美国Cel l Signal ing公司。增强型化学发光底物(ECL)试剂盒(货号：32106)购于美国Pier ce公司。

    1.2 细胞培养：人宫颈癌细胞系Hel a购于美国ATCC(Amer ican Type Cul tur e Col l ect ion)，Hel a细胞系培养在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，在37℃恒温培养箱中培养，通入5%CO2。

    1.3 c-Jun表达质粒构建和转染：人c-Jun基因的开放阅读框架全长序列经PCR扩增后以分子克隆的方法与pc DNA3.1连接后构建成c-Jun重组过表达质粒。c-Jun过表达质粒用脂质体2000按试剂操作说明书步骤进行转染：将2g/ml质粒用脂质体2000进行包裹后将其加入到无血清培养基进行混合 ......