叶 平 叶 骞 胡蓝雅文 王欢欢 王百苗 董盼攀

    1 浙江省立同德医院 浙江 杭州 310012

    2 浙江中医药大学第二临床医学院 浙江 杭州 310053

    复发性流产(RSA)是指与同一性伴侣连续发生≥2次于孕龄为20孕周之前的妊娠物或胎儿丢失(体质量<500g)[1]。生殖免疫学认为，母-胎免疫耐受微环境失调是复发性流产的重要影响因素[2]；Th17和Treg细胞分别作为调节性和效应性细胞，参与了妊娠的建立与维持。两者之间的免疫失衡可能导致妊娠失败[3]。益气补肾方为临床治疗RSA的有效自拟方，本团队前期药理研究发现，该方可调节自然流产模型小鼠CD4+/CD8+T细胞、CD28细胞及NK细胞的表达；增加孕早期及中晚期脾脏CD4+CD25+T细胞及Foxp3因子表达水平，并降低胚胎吸收率，但是否可调节Th17/Treg细胞免疫平衡，维持免疫耐受而改变妊娠结局尚未进行深入研究。对此，为进一步探讨其作用机制，本次研究采用自然流产小鼠模型，观察益气补肾方对妊娠结局、外周血Th17、Treg细胞含量、Th17/Treg细胞比例及相关细胞因子水平的影响，为益气补肾方防治复发性流产提供新的理论依据。现将研究结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 动物：SPF级雌性CBA/J小鼠40只、雄性DBA/2小鼠16只、雄性BALB/c4只，体质量18～21g。雄性DBA/2小鼠购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司[SCXK(沪)2013-0016]，雌性CBA/J、雄性BALB/c小鼠购于北京华阜康生物技股份有限公司[SCXK(京)2009-0004]。

    1.2 药物：益气补肾方组成：黄芪36g，菟丝子30g，白术18g，当归6g，党参、陈皮、升麻、柴胡各12g，中药购于浙江省中医院。制备：用8倍水浸泡，过夜，先煮沸30min，倒出药液，再加入8倍水，煮沸20min，最后再加5倍水，煮沸20min，合并药液并减压浓缩，最后配制成益气补肾方煎剂(含生药1.6g/ml)，置-20℃冰箱备用。CsA溶液：由CsA胶囊(诺华制药，批号：S0340A；规格：25mg/粒)溶于0.1%浓度甲醇溶液[将0.1ml的无水甲醇溶于99.9ml的蒸馏水(避光保存)]制成 ......