李桂锦 姚新苗

    浙江中医药大学附属第三医院 浙江 杭州 310005

    WNT10b、β-catenin、BMP-2、BMP-4、DKK1表达水平的变化，探讨益骨汤治疗骨质疏松的可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物：采用SPF级12周龄雌性SD大鼠100只，体重200±10g，浙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(沪)20080016，用于造模。

    1.2 主要试剂与仪器：益骨口服液(方由补骨脂10g，骨碎补、生地、仙灵脾、怀山药各15g，丹参30g组成)，由浙江省中医院中药房提供，制成含生药量1.0g/ml的水提液，用于去势大鼠灌胃治疗)；倍美力水溶液：美国惠氏艾尔斯特制药公司艾尔斯特药厂制造,产品批号0502090,国药准字(2001)J51(2)号。水溶液浓度为9.4μg/ml。氯氨酮：上海第一生化药业有限公司生产,批号沪卫药准字(1995)第001064号；DKK1反义寡核苷酸序列如下：5′-TCTGGTCCAAGATCTGAT-3′由上海生物工程合成；WNT10b、β-catenin、BMP2、BMP4、DKK1酶联免疫检测试剂盒(R&D Systems美国)；WNT10b、βcatenin、BMP-2、BMP-4、DKK1的PCR引物(艾菲生物技术有限公司)；PCR仪(BIO-RAD 美国)；紫外分析图像处理仪(上海天能科技有限公司)；电泳仪(BIO-RAD 美国)；半自动生化分析仪(上海三科仪器有限公司)；紫外分光光度计(Eppendorf 德国)；海尔冰箱(青岛海尔股份有限公司)；液氮容器(乐山市东亚机电工贸有限公司)；双能X线骨密度仪(型号：DPX-L美国LUNAR公司)。

    1.3 实验分组：随机分为A组(假手术组)、B组(益骨汤治疗组)、C组(倍美力阳性对照组)、D组(正常对照组)、E组(DKK-1反义寡核苷酸对照组)5组,分16笼以常规饲料喂养,自由饮水。饲养室保持良好通风,室温控制在21±1℃,湿度63%,噪音<55分贝,自由摄食、饮水,光照与黑暗时间为每12h交替 ......