费煜畅 郑戴波 潘 磊 陈培丰#

    1 浙江中医药大学第一临床医学院 浙江 杭州 310053

    2 浙江省中医院 浙江 杭州 310006

    黄芪多糖(APS)作为黄芪主要的抗癌成分之一，较多研究已表明其在抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤血管生成等方面发挥作用，且可调节机体免疫水平[1-3]。基于APS在这些方面的研究，本实验通过观察不同浓度APS及不同作用时间下脂多糖(LPS)诱导的THP-1源巨噬细胞存活率和产生IL-10、IL-12、TNF-α的表达量，探讨APS对THP-1源巨噬细胞免疫功能的影响，为进一步研究黄芪多糖的免疫调节作用机制及中药黄芪的临床抗癌效用提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料：人单核细胞(THP-1)细胞，购自上海中科院细胞库。黄芪多糖注射液(APS)由西安瑞盈生物科技有限公司生产(纯度>90%)。CCK-8(联科公司)；佛波酯(PMA)、LPS(美国Sigma公司)；RT-PCR试剂盒和逆转录试剂盒(日本TAKARA株式会社)；ELISA试剂盒(eBioscience公司)；TRIzol试剂(美国Invitrogen公司)。超净工作台(Heal Force公司)；荧光化学显微镜(日本Nikon公司)；CO2恒温孵育箱、Thermo 3111、温度梯度PCR仪、Biometra T-Gradient、ABI 7500 Real-Time PCR仪等(Applied Biosystems公司)。

    1.2 方法：分述如下。

    1.2.1 造模方法：将THP-1细胞接种于六孔板，密度为(1～2)×106/ml，每孔细胞中加入浓度为100mg/L的PMA，刺激48h后细胞形态学上转变为椭圆形、梭形或伸出伪足，由悬浮状态转变为贴壁状态，表明THP-1细胞已成功转化为巨噬细胞，在巨噬细胞内加入LPS(100ng/ml)，共培养刺激6h建立炎症模型。

    1.2.2 分组及标本选取：对药物浓度进行筛选，将THP-1源巨噬细胞(1.0×105个细胞/孔)接种于24孔细胞培养板 ......