痛泻要方对肝郁脾虚证IBS-D大鼠SCF/c-Kit信号系统的影响*
悬尾,旷场,1材料与方法,2结果,3讨论
芮晓薇 郑思慧 赵方敏 蒋佳怡 柯雅妮 张 璐 蔡利军#1 浙江中医药大学第一临床医学院 浙江 杭州 310053
2 浙江中医药大学附属第一医院 浙江 杭州 310006
腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是以反复发作的腹痛腹泻为临床特征的慢性功能性胃肠道疾病,常伴心理障碍。IBS-D发病可能与脑-肠轴功能紊乱、内脏高敏感性、肠道动力异常及精神心理因素等有关[1-2]。而内脏高敏感性、肠道动力异常与5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)等脑肠肽及SCF/c-Kit信号系统密切相关[3]。痛泻要方对于治疗肝郁脾虚证IBS-D具有良好疗效,然而其作用机制尚未完全明确,故本研究通过观测大鼠血清5-HT和结肠组织SP、SCF和c-Kit mRNA表达量的变化,探讨痛泻要方对肝郁脾虚证IBS-D的作用机制,为疏肝健脾方药在IBS-D中的运用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物:SD雄性大鼠24只,体质量200±20g。饲养条件:室温 20~24℃,相对湿度 40%~70%,噪音<60dB,光照周期12h/12h。
1.2 实验药物:番泻叶、痛泻要方(炒白术30g,炒白芍20g,炒陈皮15g,防风10g),中药饮片由浙江省中医院中药房提供并进行质量鉴定。
1.3 实验试剂及仪器:大鼠SP ELISA试剂盒;大鼠5-HT ELISA试剂盒;BCA蛋白法含量测试盒(ADS-FDB005);RNA提取试剂盒(TaKaRa,AHF1991D);RT反转录试剂盒(TaKaRa,RR036A);SYBR Green荧光定量PCR染料(TaKaRa,AK9301)。悬尾测试仪(济南益延科技发展有限公司,YLS-18A);大鼠旷场(深圳市瑞沃德生命科技有限公司,63007);荧光定量PCR仪(ABI)。
1.4 造模及干预方法:具体如下。
1.4.1 药物制备:番泻叶水煎剂:番泻叶水浸泡5h,煎煮20min,过滤浓缩至含生药0.45g/ml药液备用。痛泻要方水煎剂:炒白术、炒白芍、炒陈皮、防风水浸泡30min,煎煮30min ......
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