钟 海 孔凡创 周春晖 王晓光 刘晓琳

    嘉兴市第二医院 浙江 嘉兴 314001

    肝癌是世界范围内第五大恶性肿瘤[1]。近年来，热消融在肝癌治疗中发展迅速。本课题组研究显示[2]，在直径小于3cm的小肝癌治疗中，完全消融疗效可与手术切除媲美。但部分肝癌很难达到理想的完全消融。

    中药制剂槐耳颗粒作为肝癌根治性切除术后的辅助治疗，能显著延长无复发生存期，并有效减少肝外复发[3]。研究显示，槐耳能够有效逆转肿瘤细胞转移的初始阶段上皮间质转化(EMT)过程，从而抑制肿瘤的复发转移[4]。本研究通过建立亚致死肝癌细胞热损伤模型，探讨槐耳颗粒治疗不完全热消融后肝癌复发转移的机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料：分述如下。

    1.1.1 槐耳颗粒：国药准字：Z20000109，产品编号：B14006012409，购自启东盖天力药业有限公司。

    1.1.2 细胞株：人肝癌(Huh7)细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司。购买的Huh7细胞被接种在由10%胎牛血清和DMEM培养基组成的生长培养基中。培养环境是37℃、含5%CO2的细胞培养箱。

    1.1.3 实验试剂：DMEM细胞培养基(PM150210，Pro‐cell)；胎 牛血清(164210，Procell)；CCK-8溶液[40203ES60，翌圣生物科技(上海)股份有限公司]；TRI reagent?(T9424，美国Sigma-Aldrich公司)；Re‐vertAid? First Strand cDNA Synthesis Kit(K1622，美国Thermo Scientific公司)；RIPA裂解液(R0010，北京索莱宝科技有限公司)。

    1.1.4 仪器：细胞培养箱；恒温水浴锅(上海比朗仪器制造有限公司)；UV-1800紫外分光光度计(上海美析仪器有限公司)；BX-51光学显微镜(日本OLYMPUS公司)；Fast7500实时荧光定量PCR仪(美国ABI公司)；BIORAD凝胶成像系统(Gel Doc? XR+)

    1.2 方法：分述如下 ......