毛佩芝 吴纪恒 王龙虎 严荧燕 汪志春

    1 宁波市妇女儿童医院 浙江 宁波 315000

    2 浙江大学医学院附属儿童医院 浙江 杭州 310058

    3 浙江大学药学院 浙江 杭州 310058

    4 江苏京蟾生物资源开发有限公司 江苏 盱眙 211700

    非小细胞肺癌(NSCLC)是目前发病率和死亡率均排前列的恶性肿瘤[1]。临床试验以及实践证明，中药在提高放化疗效果、改善肿瘤耐药反应、降低术后复发和转移、延长病人生存期、提升生存质量等方面具有明显的优势[2，3]。蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bufobufo gargarizans)或黑框蟾蜍(BufomelanostictusSchneider)的干燥分泌物，是我国传统名贵中药材。研究显示，蟾酥的主要药效物质是蟾毒配基类成分，其在抗肿瘤、免疫调节以及减轻癌痛等方面有显著疗效[4，5]。因此，蟾酥及其制剂广泛用于抗肿瘤，治疗肺癌效果尤佳[6-8]。然而蟾酥抗肿瘤的作用机制复杂，作用靶点尚未明确，加上它又是毒性中药，其应用受到限制[9，10]。因此，探索蟾酥抗肿瘤的结合靶点及其作用机制，对其精准用药具有重要意义。

    分子对接技术可以通过算法模拟小分子与受体大分子蛋白之间的结合作用方式。在计算机辅助药物设计中，模拟分子对接是关键步骤，即通过算法预测药物分子与靶点结合互相作用的方式和过程[11]。分子对接技术在中药活性成分筛选和靶点确证方面有着广泛的应用前景。

    本文在前期研究的基础上[12]，采用半柔性分子对接技术，研究蟾酥有效成分与PARP 蛋白间的相互结合方式，从结合自由能、疏水作用、构象稳定性、结合亲和力等方面探讨配体抑制活性的概率，初步探究蟾酥抗肿瘤作用机制。然后，在虚拟分析的基础上，开展流式细胞术检测沙蟾毒精引起的A549 细胞凋亡实验，并检测沙蟾毒精给药后A549 细胞中cleaved PARP 的表达量，以达到与分子对接预测结果相互佐证的目的。本文研究的意义在于为蟾酥的精准用药和新药开发提供新的研究基础。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂：A549和H157细胞由浙江大学中药药理实验室提供。标准品沙蟾毒精(CAS：464-74-4)、远华蟾毒精(CAS：472-26-4)、华蟾毒它灵(CAS：1108-68-5)购自上海源叶生物科技有限公司 ......