大鼠咬合创伤早期牙槽骨基因差异表达的初步探讨(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
公司)。27 K Rat Genome Array芯片的Oligo DNA参自Oligo库(Operon公司，美国)，NucleoSpin Extract
Ⅱ Kit(Macherey-Nagel公司，德国)，LuxScan 10 KA双通道激光扫描仪(北京博奥生物有限公司)。
1.2 动物模型建立
选取由山东大学实验动物中心提供的雄性SD大鼠5只，体重(280±20) g。腹腔内注射水合氯醛，剂量为100 mg·kg-1，麻醉状态下在大鼠左侧上颌第一磨牙咬合面上粘接厚度为1 mm的方丝，用Super-bond复合树脂堆积法粘接，形成同侧下颌第一磨牙的咬合创伤模型。左侧下颌第一磨牙处牙槽骨作为实验侧，同一只大鼠对侧下颌第一磨牙处牙槽骨为对照侧。常规饮食，24 h后腹腔注射水合氯醛，拔除双侧第一磨牙，刮净牙槽窝内牙周膜，取大鼠双侧牙槽骨组织放入液氮，备用。
1.3 总RNA提取
按TrizolTM NA Isolation Reagent流程提取大鼠牙槽骨中总RNA，通过异丙醇沉淀法浓缩RNA，进一步对总RNA行过柱纯化，最后用分光光度计定量，甲醛变性胶电泳质检。
1.4 探针标记和杂交
取两侧牙槽骨组织总RNA各50 μg，逆转录合成cDNA，将cDNA用KLENOW酶标记：Cy3-dCTP标记实验组cDNA，Cy5-dCTP标记对照组cDNA，标记产物用PCR NucleoSpin Extract Ⅱ Kit纯化，纯化后抽干。
1.5 全功能组表达谱基因芯片制备和杂交
将标记的DNA溶于30 μL杂交液中 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。