重组变异链球菌表面蛋白的可溶性表达及抗体制备(2)
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参见附件。
疫苗PAc加强的策略可在较大程度上提高防龋疫苗的免疫效力。在“DNA初次免疫—蛋白质加强”免疫策略的研究中，大量高纯度的PAc的获取是整个研究的基础。由于变异链球菌表面蛋白的天然产量低，提取步骤烦琐，难以满足需要[5]，所以用基因工程的方
法大量生产无疑是最佳选择。笔者对已成功表达重组PAc(recombinant PAc，rPAc)的工程菌pET20b(+)-AP/BL21(DE3)plysS的表达条件进行优化，并用纯化
后的rPAc蛋白免疫BALB/c小鼠，制备抗rPAc多克隆抗体，为深入研究“DNA初次免疫—蛋白质加强”免疫
策略奠定基础。
1 材料和方法
1.1 rPAc表达条件的优化
在pH值分别为6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4的Luria-Bertani(LB)培养基(含100 μg·mL-1羧苄青霉素和34 μg·mL-1氯霉素)上接种pET20b(+)-AP/BL21
(DE3)plysS工程菌[4]，37 ℃条件下培养，检测光密度
(optical density，OD)值达0.6(检测波长600 nm)时，加入终浓度为1.0 mmol·L-1的异丙基-β-D-硫代吡
喃半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thigalactopyranoside，IPTG)，继续培养4 h，同时设定工程菌的未诱导表达对照组。培养结束后，4 ℃离心收集菌体，冰浴
下超声波破碎 ......
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