一氧化碳对肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β共同诱导的人牙龈成纤维细胞黏附分子表达的影响(3)
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参见附件。
VCAM-1)或25(GAPDH)个扩增循环，每个循环包括94 ℃变性30 s，59 ℃(VCAM-1)、60 ℃(ICAM-1)或55 ℃(GAPDH)退火30 s，72 ℃延伸45 s。在最后一个扩增循环，延伸为72 ℃、10 min。PCR产物用1%溴
化乙啶琼脂糖凝胶电泳检测。
1.5 瞬时转染和报告基因测定法
将包含核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)反应元件的报告基因(6-κB.luc)(德国海德堡大学曼海姆医院皮肤科Dr. Schmidt所赠)转染HGF。转染方法为DEAE-左旋糖苷法，操作详见文献[11]。同时将泛素依赖的荧光素酶报告基因也一同转染HGF。转染2 d后，用50 ng·mL-1的TNF-α和10 ng·mL-1的IL-1β刺激加入和不加入CORM的细胞。在刺激后的2、4、12、24 h用Dual-Glo荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性，从而反映转录因子NF-κB的活性。
1.6 统计分析
采用SPSS 11.0软件进行单因素方差分析或t检验。
2 结果
2.1 CO抑制TNF-α和IL-1β共同诱导的黏附分子的 蛋白表达
TNF-α和IL-1β共同诱导的黏附分子的蛋白表达见图1。由图1可见，TNF-α和IL-1β共同刺激HGF 24 h后，ICAM-1和VCAM-1的表达均显著增强，而加入CORM后，ICAM-1和VCAM-1的表达则受到显著抑制。定量分析表明，加入与未加入CORM时ICAM-1和VCAM-1的表达具有统计学差异(P<0 ......
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