舌鳞癌Tca8113细胞株干细胞相关差异表达基因的筛选及分析(2)
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SSH)技术筛选两亚群细胞中的差异表达基因，并进行相关生物信息学分析，以此来寻找肿瘤干细胞的特异表达基因，并进一步探寻其表面标志物。
1 材料和方法
1.1 细胞来源
人舌鳞癌细胞株Tca8113购自四川大学口腔疾病研究国家重点实验室。
1.2 主要试剂和材料
RPMI1640培养基、小牛血清、0.25%胰酶消化液(Gibco公司，美国)，ALDEFLUOR(StemCell Techno-logies公司，美国)，Trizol提取液(Invitrogen公司，美国)，DNTP(上海希匹吉生物技术有限公司)，PCR-
SelectTM cDNA Subtraction kit(Clontech公司，美国)，PMD-18T载体(大连宝生物工程有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 体外细胞培养 将冻存的Tca8113细胞复苏，接种于75 mL玻璃培养瓶，加入含有10%小牛血清的RPMI1640培养基，置于5%CO2、37 ℃恒温孵箱中培养。待细胞生长至对数期，0.25%胰酶消化、传代。
1.3.2 ALDH活性检测及细胞分选 制备单细胞悬液，离心弃上清，用Buffer重悬细胞，实验组中加入激活的ALDH酶作用底物(BAAA)，对照组中除加入BAAA外，另外加入ALDH抑制剂二乙氨基苯甲醛(diethy-laminobenzaldehyde，DEAB) ......
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