高致龋性变异链球菌临床分离株的初步筛选(2)
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1.4.2 蒽酮法测定细胞外多糖含量 分别取葡聚糖稀释液0.00、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80 mL，加入蒸馏水至1.00 mL，于15 ℃水浴中加入0.2%蒽酮-硫酸液3.00 mL，搅拌3 min后放入95 ℃水浴中煮6 min，冷却；加样于96孔板中，每孔100 μL，每个样品一式三份；然后于酶联反应检测仪630 nm处测定吸光度值OD630，绘制标准曲线。
取样品1.0 mL，于15 ℃水浴中加入0.2%蒽酮-硫酸液3.00 mL，搅拌3 min后放入95 ℃水浴中煮6 min，冷却；加样于96孔板中，每孔100 μL，每个样品一式三份；然后于酶联反应检测仪630 nm处测定吸光度值OD630。根据标准曲线及稀释倍数计算样品中多糖的含量。
1.5 耐酸实验[8]
分别取各变异链球菌临床分离株和国际参考菌株的菌悬液，按菌液与培养基体积比为1∶10的比例将其分别接种至初始pH值为4.0～7.0(以pH值0.5为间隔)的BHI培养基中，37 ℃厌氧条件下培养48 h。将各菌株48 h培养物经4 ℃、3 000 r·min-1离心15 min，弃上清液，细菌沉淀物用5 mL无菌中性PBS缓冲液稀释，振荡器上混匀1 min，以无菌中性PBS缓冲液作阴性对照，于可见光分光光度计600 nm处测定吸光度值OD600。每个样品一式三份。
本研究用各菌株在不同pH值条件下OD600的平均值(用x表示)评价变异链球菌临床分离株耐酸能力的强弱。设pH值为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0时的OD600测量值分别为x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7，则x=(x1+x2+x3+x4+x5+x6+x7)/7 ......
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