人β防御素—4在牙龈组织表达的新发现(2)
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参见附件。
PCR)的扩增模版，每个反应管中加入10 μL RNA，用cDNA Reverse Transcription Kits合成cDNA，-20 ℃
保存备用。
1.3.2 定量检测hBD-4的表达 用iCycler Thermal Cycler仪对hBD-4行real time RT-PCR，SYBR Green作为荧光染料对PCR产物进行实时监控。引物由大连宝生物公司合成提供，hBD-4正向引物序列：5’-ATGCAGAGACTTGTGCTGCTATTA-3’，反向引物序列：5’-AGGGTTTTGTACGATTCAGTAAG-3’；β-actin正向引物序列：5’-CATGGATGATGATATCGC-CGCG-3’，反向引物序列：5’-ACATGATCTGGGT-CATCTTCTCG-3’。反应系统总体积为25 μL：12.5 μL的PCR缓冲液，9.5 μL的无酶水，2 μL的引物，1 μL cDNA作为PCR反应模版。hBD-4的检测扩增条件为：95 ℃ 3 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，95 ℃ 1 min，循环50次，55 ℃ 1 min，55 ℃ 10 s。β-actin扩增条件为95 ℃ 3 min；95 ℃ 15 s，69 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，95 ℃ 1 min，循环50次，55 ℃ 1 min，55 ℃ 10 s。PCR反应结束后进行溶解曲线分析，以证实扩增产物的特异性，分析是通过实时监测SYBR Green的荧光信号强度变化进行的 ......
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