Osterix过表达对人牙周膜细胞骨向分化的影响(2)

http://www.100md.com 2013年2月1日 赵艳红 李洪发 王春玲 杨强 郑朝 付雅丽

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    参见附件。

     1.4 人牙周膜细胞的体外加力

    本研究参照以往的报道[9]，采用离心加力法对

    细胞加载机械力。将分别种有无转染、转染空质粒(pcDNA3.1 flag)、转染目的基因(pcDNA3.1 flag-

    Osx)3组细胞的6孔板在无菌条件下用无菌密封胶密封，置于37 ℃离心机加力支架中，以离心机加力(631 r·min-1，约80 g相对离心力)6 h。此加力方式相当于对人牙周膜细胞施加接近正畸临床的持续压力，大小约为16 g·cm-2，属于正畸临床轻力范围[8]。

    1.5 逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-poly-

    merase chain reaction，RT-PCR)

    采用Trizol法提取细胞总RNA，并进行质量测定。应用cDNA反转录试剂盒建立反应体系，离心混匀后置于循环变温加热器进行反转录。反应条件为：37 ℃ 1 h，95 ℃ 5 min。生成的cDNA置冰上进行后续实验或保存于-20 ℃备用。

    取2 μL cDNA，采用LightCycler FastStart DNA Master SYBR Green Ⅰ建立反应体系，放入LightCy-

    cler机器内，按照实验说明进行实时定量PCR。反应程序为：95 ℃预变性10 min；95 ℃变性10 s、55 ℃退火10 s、72 ℃延伸5 s ......

    http://www.100md.com/html/paper/1000-1182/2013/02/21-1.htm

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