4种牙科金属材料对成纤维细胞L929凋亡相关基因及蛋白表达的影响(2)
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将对数生长期的L929细胞以浓度为每毫升6×104个接种于放有盖玻片的6孔板，24 h细胞贴壁后弃去原培养基，加入不同浸提液培养48 h。弃上清液，0.1 mol·mL-1 PBS清洗5 min×3，95%乙醇室温固定10 min，0.1 mol·mL-1 PBS清洗5 min×3。取出细胞爬片，晾干，用中性树胶黏于载玻片上，PBS冲洗细胞爬片，3%过氧化氢室温静止10 min阻断内源性过氧化物酶的活性，0.1 mol·mL-1 PBS清洗5 min×3。加入0.3%Triton-100，室温30 min，增加细胞的通透性，0.1 mol·mL-1 PBS清洗5 min×3。加50 μL一抗(1∶200)，阴性对照用PBS代替一抗，放置于湿盒中4 ℃过夜，0.1 mol·mL-1 PBS清洗5 min×3。加50 μL的二抗，室温孵育40 min，0.1 mol·mL-1 PBS清洗5 min×3。加DAB溶液显色3 min。自来水冲洗，苏木素复染3 min，盐酸乙醇分化，自来水冲洗10 min，梯度乙醇脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片，镜下观察并拍摄照片。每张切片随机选取3个视野，caspase-3、8、9在细胞质中呈棕黄色染色为阳性表达，以细胞未着色或轻微着色为阴性。在高倍镜(×400)下拍摄照片，应用Image Pro Pluss 6.0图像分析系统测平均光密度(optical density，OD)值，对各组切片的caspase-3、8、9表达强度进行半定量分析。
1.6 统计学分析
采用SPSS 11 ......
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