两种多孔生物玻璃支架材料的体外细胞相容性研究(2)
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参见附件。
有成骨性的兔BMSCs传代培养至第3～5代用于以下
实验。
1.4 材料浸提液细胞毒性实验
将同样规格大小的两种支架材料(4006、45S5)
计算表面积后，按3 cm2·mL-1的比例使用条件培养液浸泡，37 ℃下浸提2 d，得到浸提液。取材料浸提液与条件培养液按比例配成100%(即纯材料浸提液)、50%、25%、12.5%、6.25%、0%(即纯条件培养液)的溶液。
将BMSCs用胰酶消化后，制成5×105 个·mL-1浓度的细胞悬液，接种入96孔板的72孔中，培养24 h，待细胞稳定贴壁生长后进行下一步实验。用含不同
浓度浸提液的培养液替代96孔板中原纯条件培养液进行细胞培养，每种浓度各培养6孔细胞。培养的第1、3天，每种浓度取3孔，MTT法测定各孔的吸光度(D490)，取均数。另测未放入细胞的纯材料浸提液(即空白浸提液)、未放入细胞的纯条件培养液(即空白培养液)的吸光度值作为校正用。将纯材料浸提液、纯条件培养液培养细胞得到的吸光度值，减去相应空白浸提液和空白培养液的吸光度，得到校正值，用校正值进行分析。
1.5 最佳复合浓度筛选试验
在24孔板中分别放入已用条件培养液预湿过24 h的4006材料和45S5材料，每种材料各12孔。预先制备好BMSCs细胞悬液，使其终密度分别为2×104、2×105、2×106、2×107 个·mL-1。用可调手动移液器将细胞悬液以每次10 μL的量，逐次滴加到材料上，直至材料饱和而没有含细胞的培养液流出为止，每种浓度每种材料接种3孔。置于37 ℃、5%CO2及100%饱和湿度的培养箱中 ......
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