塞来昔布提高耐长春新碱细胞株KB/VCR细胞化疗敏感性的研究(2)
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参见附件。
1.4 Western印迹法检测细胞P-gp、Bcl-2、Bcl-XL
的表达
将KB/VCR细胞分别用含10 μmol·L-1塞来昔布(塞来昔布组)、1.5 μmol·L-1长春新碱(长春新碱组)、10 μmol·L-1塞来昔布+1.5 μmol·L-1长春新碱(塞来昔布+长春新碱组)及10 μmol·L-1塞来昔布+1.5 μmol·L-1长春新碱+100 μg·L-1 PGE2(塞来昔布+长春新碱+
PGE2组)的培养基，于37 ℃、5%CO2条件下培养48 h。然后收集细胞并用冰PBS液洗涤3次。用含1%Triton X-100的细胞裂解液裂解细胞。收取总蛋白，按照常规的方法进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dod-
cyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)、转膜。一抗为鼠抗人P-gp单克隆抗体(1∶
1 000)、鼠抗人Bcl-2单克隆抗体(1∶400)、鼠抗人Bcl-XL单克隆抗体(1∶400)、鼠抗人β-肌动蛋白单克隆抗
体(1∶2 000)，二抗为荧光标记的羊抗鼠抗体(1∶300)，进行抗原抗体反应，然后进行荧光显色并测定反应条带灰度值，以β-肌动蛋白作为内参，计算相对灰度值，重复3次。
收集相同数量的KB和KB/VCR细胞，提取总蛋白质，按常规方法进行SDS-PAGE、转膜。一抗为鼠抗人P-gp单克隆抗体(1∶1 000)、鼠抗人β-肌动蛋白单克隆抗体(1∶2 000) ......
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