雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖分化的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.3 统计学分析
采用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行处理，所得实验数据以均数±标准差表示，多组比较采用单因素方差分析，并用LSD方法进行多重比较。
2 结果
2.1 原代人胚MCCs的形态
原代细胞接种1 d后完成铺伸；接种第5天细胞相互融合，密度为40%；接种第7天细胞伪足伸长，相连成片，成簇聚集，细胞密度达50%；接种第13天细胞排列紧密，融合达到80%(图1)。
2.2 传代人胚MCCs的形态观察
原代细胞培养至12～13 d第1次传代。传代培养的MCCs接种后6～8 h开始贴壁，第3～5天快速增殖，呈铺路石状(图2左)，细胞伸出伪足相互融合，第7天细胞密度达到80%(图2右)。
2.3 人胚MCCs的苏木精-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色结果
人胚MCCs主要呈三角形、多角形，细胞质均匀丰富，染成浅红色；细胞核呈圆形、椭圆形，染成浅蓝色，偏向细胞一侧，可见1～2个染成深蓝色的核仁(图3)。
2.4 人胚MCCs的鉴定结果
甲苯胺蓝染色后，细胞质内可见均匀的紫蓝色异染基质，细胞核染成深蓝色，结果为阳性(图4左)。Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色后，细胞质中可见片状或团块状棕黄色颗粒，细胞核复染为蓝色，结果阳性，阳性率达95%(图4右)。
2.5 第二代人胚MCCs的生长曲线
传代1 d后MCCs重新贴壁，生长缓慢，少数细胞未能贴壁生长，细胞数目有损失，细胞生长处于起始期；第2天开始，细胞适应生长环境，进入快速增殖期；第3～4天细胞生长速度极快，细胞数目成倍增长，生长曲线陡然上升，细胞生长处于对数期；第5～7天增殖速度减慢，第8天细胞增殖趋于平缓，进入平台期(图5)。
2.6 雌激素对MCCs增殖分化的影响
雌二醇对MCCs增殖分化的影响见表1。MTT法比色结果显示：10-6 mol·L-1组、10-12 mol·L-1组作用后OD值均低于对照组(P<0.05)，且10-6 mol·L-1组OD值明显低于10-12 mol·L-1组(P<0.05)，表明高浓度与低浓度E2均可抑制髁突MCCs的增殖与分化，高浓度抑制作用更强。10-10 mol·L-1组、10-8 mol·L-1组作用后OD值均高于对照组(P<0.05)，且10-8 mol·L-1组OD值高于10-10 mol·L-1组(P<0.05)，表明相当于生理浓度的E2可促进细胞的增殖分化，且10-8 mol·L-1 E2促进作用最强。E2作用48、72 h，10-6 mol·L-1组OD值持续下降(P<0.05)，作用72 h降至最低(P
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。