p75神经营养蛋白受体阳性舌鳞状细胞癌细胞的生物学特性研究(2)
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1 材料和方法
1.1 材料
Tca-8113、Cal-27细胞株来源于口腔舌鳞状细胞癌，由上海交通大学附属第九人民医院口腔颌面外科肿瘤生物实验室惠赠。Tca-8113细胞株用含10%FBS(杭州四季青生物工程材料研究所)的RPMI1640培养液培养。Cal-27细胞株用含10%FBS(GIBCO公司，美国)的高糖DMEM培养液培养。PE标记的鼠抗人p75NTR抗体及PE标记的小鼠骨髓瘤蛋白IgG1，κ抗体均购自美国BD公司。
1.2 流式细胞仪检测p75NTR阳性细胞的表达
将生长状况良好并处于对数生长期的Tca-8113细胞制备成单细胞悬液，并且调整细胞密度为1.0×106个·mL-1 。实验分为2组，实验组加入100 μL PE标记小鼠抗人p75NTR抗体，对照组加入等量的PE标记小鼠骨髓瘤蛋白IgG1，κ。放入冰里置于震荡箱中蔽光孵育半小时，1 000 r·min-1离心5 min，吸弃上清后Buffer I l mL冲洗吹打(反复冲洗、离心2次)，重悬于400 μL PBS中。将加入等量PE标记小鼠骨髓瘤蛋白IgG1，κ的对照组先上机调节机器参数，然后取实验组上机检测细胞荧光值，分析p75NTR阳性细胞的百分含量，重复3次取平均值。同法处理Cal-27细胞。
1.3 p75NTR阳性细胞生物学特性检测
1.3.1 以p75NTR为标记分选阳性细胞作为实验组 将生长状况良好并处于对数生长期的较大数量的2种舌鳞状细胞癌细胞(约1 ......
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