醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞生长及人类错配修复基因1甲基化水平的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.2.2 GAA对细胞生长作用的影响 调整细胞密度为每毫升5×104～8×104个，置于96孔板中，加入终浓度分别为10、20、40、80 μmol·L-1的GAA后共培养24、48、72 h，每组分别设3个平行复孔，每个时间点实验重复3次，使用常规MTT法进行实验；以常规培养不加GAA的细胞作为对照。倒置显微镜下观察细胞形态变化，并计算GAA作用24、48、72 h的细胞抑制率及IC50值。细胞抑制率(%)=(对照组平均OD值-实验组平均OD值)/对照组平均OD值×100%。
1.2.3 hMLH1基因甲基化水平检测 应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nested methylation specific polymerase chain reaction，nMSP)检测Tca8113细胞在GAA作用48、72 h后hMLH1基因甲基化水平的改变。收集细胞，提取基因组DNA，亚硫酸氢钠修饰，纯化DNA。以修饰后的DNA作为模板进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)，30 μL反应体系：样品DNA 2 μL，PCR mix 15 μL，上下游引物各1 μL，双蒸水11 μL。引物由北京康为世纪生物有限公司设计合成：5’-TTTTAGGAGTGAAG-GAGGTTA-3’(正向)，5’-CCAAAAAAAACAAA-ATAAAAATC-3’(反向)，扩增片段为115 bp。
以第1轮PCR产物为模板进行甲基化特异性检测，根据参考文献[4]设计nMSP引物序列。甲基化引物：5’-ACGTAGACGTTTTATTAGGGTCGC-3’(正向)，5’-CCTCATCGTAACTACCCGCG-3’(反向) ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。