牙龈卟啉单胞菌感染对大鼠血管平滑肌细胞细胞间黏附分子—1表达的影响(2)
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1.3 细胞培养
1.3.1 大鼠胸主动脉平滑肌细胞的原代培养 10%水合氯醛(每100 g体重3 mL)腹腔麻醉SD大鼠后，于无菌条件下，开胸，揭起左侧肺叶，紧靠脊柱的左前方取胸主动脉，长约15 mm，冲洗去除残留的血液，剔除血管外膜，将血管剪开，用刀片轻刮去除血管内膜。将组织剪成0.5～1 mm3的小块，接种于25 cm2培养瓶中，于37 ℃恒温培养箱内(5%CO2，37 ℃，饱和湿度条件)放置3～4 h，使组织块较牢固地黏附于培养瓶壁，加入0.5～1 mL含20%胎牛血清的DMEM培养液，3～5 d更换培养液1次。
1.3.2 大鼠胸主动脉平滑肌细胞的传代培养 当单层细胞长满培养瓶底的80%时可进行传代，弃去原培养液，加入0.25%胰蛋白酶约1 mL，显微镜下观察。当细胞收缩呈圆形时，立即加入含10%胎牛血清的DMEM培养液终止消化。用吸管反复吹打瓶壁使细胞自瓶壁上脱落，1∶2分装成两瓶。
1.3.3 细胞鉴定以及超微观察 取对数生长期的单层细胞，弃去原培养液，加入0.25%胰蛋白酶消化，1 000 r·min-1离心10 min，PBS清洗3次后 ......
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