乳铁蛋白下调脂多糖激发的人牙周膜细胞Toll样受体4表达的研究(2)
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参见附件。
1 材料和方法
1.1 主要材料和设备
大肠杆菌LPS、Ⅰ型胶原酶、乳铁蛋白(Sigma公司，美国)，胎牛血清、高糖DMEM细胞培养液(Hyclone公司，美国)；RNAiso Plus(总RNA提取试剂)，反转录试剂盒、RT-PCR试剂盒(Takara公司，日本)；抗荧光衰减封片剂、山羊血清封闭液、4，6-联脒-2-苯基吲哚 (4’，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)染色液(武汉博士德生物工程有限公司)；鼠抗人TLR4一抗(Abcam公司，英国)，山羊抗小鼠二抗(Santa Cruz公司，美国)；流式抗体CD29、CD90、CD105、CD44(eBioscience公司，美国)；流式细胞仪(BD公司，美国)；Real-time RQ RT-PCR仪(Applied Biosystems公司，美国)；生物安全柜、离心机(Thermo Electron公司，美国)；显微镜及照片获取系统(Olympus公司，日本)。
1.2 人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells，hPDLCs)分离培养和鉴定
1.2.1 hPDLCs分离和培养 取南方医科大学南方医院口腔科15～25岁因正畸减数拔除的志愿者牙周组织健康的前磨牙，牙齿拔出后立即置于含双抗的DMEM培养液中，低温转移至实验室，用含双抗的PBS冲洗3遍，无菌湿润条件下刮取根中1/3的牙周膜组织，剪成1 mm3大小的组织块，PBS冲洗并离心后加入200 μLⅠ型胶原酶，37 ℃培养箱内消化10 min ......
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