乳铁蛋白下调脂多糖激发的人牙周膜细胞Toll样受体4表达的研究(3)
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1.5 统计学分析
使用SPSS 13.0软件对所得数据进行单因素方差分析，RT-PCR结果两两比较用Dunnett T3检验，免疫荧光计分的比较用LSD检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 hPDLCs的培养和鉴定
组织块酶消化法分离培养hPDLCs游出时间为5 d左右，且游出率和成活率较高。形态学观察：游出细胞多为梭形和星形，体积较小，核卵圆形且位于细胞质中央，为成纤维细胞样细胞(图1)。流式细胞仪分子表型检测显示：CD44、CD29、CD90和CD105标志的阳性细胞率分别为99.13%、98.17%、100%和78.21%，说明培养细胞为间充质来源。半定量PCR产物电泳结果见图2：Ⅰ型胶原阳性，Ⅳ型胶原阴性，此为牙周膜细胞特异性标记，证实培养细胞为牙周膜细胞。
2.2 LF对LPS激发的hPDLCs TLR4 mRNA表达的影响
RT-PCR检测结果显示：空白对照组、LPS组、LPS+LF组mRNA相对表达量分别为1.444±0.439、4.558±1.580、1.704±0.481。LPS刺激后hPDLCs的TLR4 mRNA表达增高；加入LF后，TLR4 mRNA表达下降；LF作用后TLR4 mRNA的表达与空白对照组无明显差异(P>0.05)，但明显低于LPS刺激组(P<0.05)。
2.3 LF对LPS激发的hPDLCs TLR4蛋白表达的影响
hPDLCs爬片的免疫荧光染色结果显示：TLR4主要表达于细胞膜和细胞质中，阳性表达为绿色荧光，细胞核呈蓝色(图3)；以PBS代替一抗的阴性对照组染色均为阴性 ......
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