间质液压与涎腺腺样囊性癌恶性表型的关系及相关分子机制(2)
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参见附件。
1 材料和方法
1.1 试剂
ACC高转移株ACCM、低转移株ACC2由四川大学口腔疾病研究国家重点实验室提供。Trizol试剂盒(Life Technologies公司，美国)，逆转录试剂盒及实时荧光定量聚合酶链反应试剂盒(TaKaRa公司，日本)，MMP9抗体、山羊抗兔二抗、辣根过氧化物酶复合物及显色剂DAB抗体(北京中杉金桥生物技术有限公司)，表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)抗体(Bioworld Technology公司，美国)，磷酸化表皮生长因子受体(phospho-rylation epidermal growth factor receptor，P-EGFR)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation extra-cellular signal-regulated kinase，P-ERK)、KGF抗体(Abcam公司，美国)。过氧化物酶标记的二抗及增强化学发光底物(Millipore公司，美国)。
1.2 细胞培养
ACC细胞培养：在RPMI 1640、10%小牛血清、100 U·mL-1青霉素及100 μg·mL-1链霉素培养基中，于37 ℃、5%CO2培养箱中孵育，细胞传代采用0.25%胰蛋白酶消化细胞。细胞生长至70%～80%用于后续实验。
1.3 实验分组
取对数期生长的ACC2接种于培养面积为25 cm2的细胞培养瓶中 ......
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