4—1BBL—B7—H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用(3)
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参见附件。
1.6 建立人口腔鳞癌PBL-SCID小鼠嵌合模型
先采集鼠血200 μL，经酶联免疫吸附法测定IgG小于5 μg·mL-1者进行实验，排除免疫渗漏。调整人外周血单核细胞浓度为6.0×107·mL-1。根据分组，A、B、C、E组SCID小鼠腹腔注射0.5 mLPBMC，D组腹腔注射0.5 mL PBS；1 d后将事先制备好处于对数生长期的Tca8113细胞注入A、B、C、D组SCID小鼠背部皮下，每只鼠5×106个细胞(0.2 mL)。E组小鼠背部皮下注入PBS。然后注射rIL-2，每次2 000 U，每周2次，连续注射3周。
1.7 检测及鉴定
每周定期观察小鼠的生物学行为，并测量肿瘤体积，通过游标卡尺测量瘤体最长径(a)和最短径(b)，按体积(V)=0.5×ab2的公式计算肿瘤体积。
免疫重建后第3、5、7周分别取尾静脉血，每次100 μL，酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量。
第8周通过摘眼球取血，各提取2份，分离出PBMC，分别加入FITC-PE标记的人CD3+、CD56+的双抗，于4 ℃反应30 min，溶血素溶血5 min，PBS洗涤3次，流式细胞仪检测淋巴细胞比例。
第9周颈椎脱臼法杀死小鼠，观察并记录肿瘤外观特点。倒置荧光显微镜下观察各组肿瘤细胞转染腺病毒载体是否成功及肿瘤组织冰冻切片中人4-1BBL-B7-H3的表达 ......
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