缺血再灌注对大鼠颌下腺分泌功能的影响(2)
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1.2.2 颌下腺分泌量测定 腺体经历1、12、24、72 h再灌注后，各组大鼠再次麻醉，游离两侧颌下腺导管至口底后切断导管(图1B、C)，并于断端处插入直径约0.5 mm的聚乙烯塑料小管(由10 μL移液管枪头拉制)测量腺体的分泌量(图1D)。测量腺体分泌量的方法采用Schirmer实验，以5 min内滤纸条(35 mm×5 mm)湿润的长度来表示[6]。测量结果重复3次取平均值。
1.2.3 颌下腺组织形态学观察 大鼠两侧颌下腺游离后摘除，取部分腺体组织于10%中性甲醛固定，经水洗、脱水、透明、包埋，切成5 μm厚的切片。腺体组织切片经苏木精-伊红(hematine-eosin，HE)染色，封固后于光学显微镜下观察腺体的组织学形态。
1.2.4 活性氧(reactive oxygen species，ROS)检测 将部分新鲜颌下腺组织制成10 μm厚的冰冻切片，按氧化应激ROS检测试剂盒的说明检测腺体组织中ROS水平。荧光显微镜下观察(激发波长490 nm，散发波长520 nm)，绿色荧光信号表示组织内ROS的水平。细胞核由4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-
diamidino-2-phenylindole，DAPI)复染，显示出蓝色荧光信号。
1.2.5 腺体细胞凋亡检测 取5 μm厚的石蜡包埋组织切片，按照TUNEL凋亡检测试剂盒的说明检测腺体组织内细胞凋亡的水平，然后用甲基绿复染。通过光学显微镜观察，凋亡细胞核呈现深棕色，非凋亡细胞核呈现青绿色至淡绿色。每组标本在400倍的显微镜下随机选取10个视野，观察并记录各实验组TUNEL阳性细胞的数目。
1.2.6 统计学分析 采用SAS 9.1.3统计学软件对数据进行随机样本t检验，检验水准为双侧α=0.05。数据结果以均值±标准差表示。
2 结果
2.1 缺血再灌注后大鼠颌下腺分泌功能的变化
缺血再灌注后颌下腺分泌量的变化见图2：实验侧颌下腺分泌量在再灌注1、12 h时与对照侧相比明显降低(P<0.01)；再灌注24 h，实验侧腺体分泌量开始增加，到再灌注72 h时，实验侧腺体的分泌量接近正常水平(P>0.05)。
图2缺血再灌注后颌下腺的分泌量
Fig2The secretory function of the submandibular glands after is-
chemia reperfusion
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