6~8岁儿童龋病相关唾液蛋白组的电喷雾离子肼—串联质谱分析(2)
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参见附件。
电喷雾离子肼—串联质谱(electrospray ioniza-tion ion-trap tandem mass spectrometry，ESI-MS/MS)是近年来发展成熟的高通量蛋白组分析工具，具有样本需求量小、分析速度快、精度高的特点[7-8]。本研究旨在使用ESI-MS/MS分析不同龋敏感性儿童的唾液蛋白组，探索唾液蛋白组与龋病之间的关系，从而推动龋敏感性相关生物标志物的研究。
1 材料和方法
1.1 实验对象及分组
根据WHO编著的《口腔健康调查基本方法》第4版龋病诊断标准，对重庆市一小学6~8岁第一恒磨牙均已萌出的儿童进行筛查，确定20名受试者，并与监护人签署知情同意书。将受试者分为高龋组(10名，其中男、女各5名)和无龋组(10名，其中男、女各5名)，高龋组纳入标准为龋失补牙数(decayed-missing-filled tooth index，dmft)大于等于8；无龋组纳入标准为dmft=0[9-10]。所有受试者均为汉族儿童，重庆市户口，无长期(>3个月)异地居住史；检查前1个月未服用抗生素，除龋齿外无其他口腔疾病、先天性疾病和系统性疾病。本研究获得了重庆医科大学附属口腔医院伦理委员会的批准。
1.2 样本收集以及聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium do-
decyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)
受试者取样前一晚及当天早晨均未刷牙，早晨未进食，在上午8—9点钟进行样本收集，嘱受试者把自然的、未受刺激的唾液缓慢吐入50 mL无菌塑料杯内，持续5 min，无菌EP管收集5 mL唾液样本，冰浴下转-20 ℃冰箱，干冰冷冻运回实验室进行样本制备[11-12]。将高龋组所有样本混合，命名为SH；将无龋组所有样本混合，命名为SN。超滤浓缩SH和SN，Brandford法定量后进行SDS-PAGE。
1.3 过滤-辅助的蛋白酶解(filter-aided sample prepa-
ration ......
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