人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/(2)
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种植体表面良好的处理，有利于尽快实现骨整合，从而履行功能。以往的种植体表面处理研究主要集中在种植体表面的物理化学处理，而基因水平的生物化学处理较为少见。人骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)具有独特的诱导成骨活性[1]。其中，BMP2的诱导成骨活性最强，可促进Ca、P在钛金属表面沉积，提高种植体-骨界面结合率，加快骨结合进程。壳聚糖(chitosan，CS)[2]作为一种非病毒载体，是自然界中唯一一种带阳离子的可降解纳米级载体，具有良好的生物相容性、可降解性和黏膜黏附性，特别适合包载蛋白质、多肽、疫苗和基因等生物活性大分子[3-5]。本研究利用基因重组技术在体外构建人BMP2基因的真核表达重组质粒，并采用去溶剂法合成壳聚糖/质粒纳米复合体，为后续基因转染形成活性因子激活成骨信号通道以加快种植体周成骨的研究奠定基础。
1 材料和方法
1.1 材料和仪器
pMD18T-hBMP2-His(带有组氨酸标签的人骨形态发生蛋白2模板质粒，北京义翘神州生物技术公司)，pIRES2-EGFP(携带有增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体，含卡那霉素抗性基因，Clontech公司，美国)，感受态大肠杆菌DH5α(Promega公司，美国)，限制性内切酶(Takara公司，日本)，T4 DNA连接酶(NEB公司，美国)，质粒抽提试剂盒(Qiagen公司，美国)， DNA引物合成及测序(Invitrogen公司，美国)，核酸蛋白分析仪(Im-plen公司 ......
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