MC3T3—E1细胞流体剪切力敏感信号通路的基因芯片研究(2)

http://www.100md.com 2014年5月1日 尚针针 李欣 孙惠强 贾可丽

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    参见附件。

     E1细胞加载筛选出的FSS，通过基因芯片检测差异表达基因及相关信号通路，希望进一步明确应力作用下成骨细胞参与骨改建的分子生物学机制。

    1 材料和方法

    1.1 实验材料

    MC3T3-E1细胞株(ADCC公司，美国)，胎牛血清、胰蛋白酶(Gibco公司，美国)，TRIZOL试剂、聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)试剂盒、Invitrogen Superscript双链cDNA合成试剂盒(Invitrogen公司，美国)，平行板流室加力装置(四川大学华西口腔医学院FSS课题组提供)，Nim-blegen杂交系统4(Roche NimbleGen公司，美国)，Molecular Devices GenePix pro V6.0(Axon Instru-ments公司，美国)，NimbleGen单色DNA标记试剂盒、Mus musculus 12×135k v2 array小鼠全基因表达谱芯片(Nimblegen公司，美国)。

    1.2 细胞培养

    用含10%胎牛血清的α-MEM培养MC3T3-E1细胞，培养基包含1×105 U·L-1青霉素及100 mg·L-1链霉素，置5%CO2、37 ℃培养箱中培养，3 d换液1次，待细胞生长至80%～90%时用于后续实验。

    1.3 加载FSS

    实验分为加力组和对照组，细胞按每孔2×105个接种于放置在六孔板中的盖玻片上，细胞培养箱静置培养至细胞完全贴壁 ......

    http://www.100md.com/html/paper/1000-1182/2014/05/27-1.htm

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