人牙龈干细胞的分离鉴定及基质细胞衍生因子—1对其趋化效应的研究(3)
1.2.6 免疫荧光法检测SDF-1受体CXCR4在人GMSCs上的表达 将人GMSCs制成细胞爬片，进行免疫荧光染色。4%多聚甲醛室温固定15 min，10%山羊血清37 ℃封闭30 min后滴加适量稀释后的CXCR4抗体(1∶50)，以PBS代替一抗作阴性对照，置于湿盒中4 ℃孵育过夜。次日在37 ℃下避光孵育l h后加入FITC荧光标记的二抗，避光孵育1 h，用5 ?g·mL-1 DAPI复染细胞核5 min，检测趋化因子SDF-1受体CXCR4的表达。1.2.7 SDF-1对人GMSCs的趋化效应 用多聚碳酸膜上有8 μm微孔的24孔Transwell细胞培养室检测人GMSCs对SDF-1的趋化反应[7-8]。将第3代GMSCs调整至细胞密度为5×105个·mL-1，在细胞培养室的上腔分别加入200 μL细胞悬液(含0.01% FBS的α-MEM培养基)，实验组的下腔分别加入终质量浓度为100、200 ng·mL-1 SDF-1和50 μg·mL-1 CXCR4中和抗体的含0.01%FBS的α-MEM培养基500 μL。空白对照组下腔中加入含0.01%FBS的α-MEM培养基500 μL ......
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