人基质金属蛋白酶－2纤维接蛋白样片段的原核表达及单抗制备
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摘要：目的 在体外原核表达基质金属蛋白酶—2(MMP—2)纤维连接蛋白样片段，制备抗MMP—2特异性的单克隆抗体。方法 体外掊养EAhy926内皮细胞，收集细胞后抽提总RNA，利用所合成引物经RT—PCR获得纤维连接蛋白样片段cDNA，与PET206b(+)表达载体重组后转化大肠杆菌BL21(DE3)plus，挑选阳性克隆后，经IPTG诱导表达蛋白。蛋白经次氮基三乙酸镍琼脂糖(NlNTAagarose)柱纯化浓缩后免疫Balb/c小鼠，尾静脉加强后取脾细胞融合，E1.ISA法筛选阳性克隆，制备腹水。结果 原核表达MMP-2纤维连接蛋白样片段大小为21 kd，表达量占菌体总蛋白25%，经Ni-NTAagarose柱纯化后，获得了部分纯化的蛋白。小鼠脾细胞与杂交瘤细胞融合后筛选获得1株单克隆抗体。结论 抗MMP—2特异性抗体的获得为MMP-2测定提供了一个有效工具，为进一步研究MMP—2的功能及探讨MMP-2在实体瘤及血液肿瘤发病过程中的作用奠定了基础。
关键词：MMP—2；原核表达；单克隆抗体
中图分类号：R977.3 文献标识码：A 文章编号：1673—0399(2005)01—0027—04
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