pcDNA 3.0-tyr转染GM细胞及鉴定
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摘要:目的 研究pcDNA 3.0-tyr在正常人成纤维母细胞株(GM0639细胞) 中的表达。方法 pcDNA 3.0-tyr真核表达质粒扩增、纯化后经测序、酶切 鉴定;电穿孔法将pcDNA 3.0-tyr转染GM细胞,RT-PCR检测;测定490 nm吸光度值,细胞爬 片Fontana染色,证实酪氨酸酶基因表达及其表达水平。结果 测序及酶切 结果提示pcDNA 3.0-tyr质粒含有酪氨酸酶全长cDNA片段;转染pcDNA 3.0-tyr的细胞的 PCR产物长度与预期长度一致,而转染pcDNA 3.0空载体的细胞PCR产物无此条带;转染pcDNA 3 .0-tyr的GM细胞的A490显著高于转染空载体的细胞及未转染的GM细胞(P
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