人白细胞介素－17Ｆ基因克隆及在大肠杆菌中的表达
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摘要：目的 克隆人白细胞介素-17F基因，并构建含有该目的基因的重组原核表达载体，获得高效表达hIL-17F的基因工程菌。方法 利用RT-PCR法，以PHA活化的人外周血单个核细胞的总RNA为模板，扩增出hIL-17F cDNA的编码序列，并分别亚克隆至pUCm-T载体和原核表达载体pGEX-5X-3中，进行PCR、酶切鉴定和DNA序列测定。将重组原核表达载体转化感受态大肠杆菌BL21后经IPTG诱导表达获得包涵体融合蛋白，且Western印迹鉴定。结果 PCR产物大小及其单酶切鉴定均证明所 克隆的基因是hIL-17F，DNA序列测定进一步证实与GeneBank报道的序列完全一致。成功构 建了重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F，并在大肠杆菌中获得高效表达，约占菌体总蛋白的55%，且Western印迹证实确为目的蛋白。结论 该基因系国内首次 克隆，hIL-17F基因重组体的构建和在大肠杆菌BL21中的高效表达，为进一步探讨其生物 学活性和应用奠定了基础。
关键词：白细胞介素-17F；RT-PCR；基因克隆；原核表达
中图分类号：R392.13 文献标识码：A 文章编号：1673-0399(2005)06-0981-05
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