胰岛素基因逆转录病毒载体在人骨髓间充质干细胞表达的实验研究

http://www.100md.com 2006年4月1日 王志伟 钱海鑫 陆玉华 朱铭岩

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     摘要：目的 构建携带胰岛素基因逆转录病毒载体，使其在人骨髓间充质干细胞(hMsCs)内稳定表达。方法通过RT-PCR法从人胰腺组织中提取胰岛素基因片段，并将其连接入逆转录病载体pLNCX，经包装细胞PT67的包装后，获得含外源性胰岛素基因的病毒颗粒(病毒滴度达4.2×10⁶cfu/ml)并感染hMSCs，经过G₄₁₈筛选后，用RT-PCR法、免疫荧光法、放射免疫法、葡萄糖刺激试验分析胰岛基因的表达情况。结果 携带胰岛素基因的逆转录病毒载体构建成功，转导入hMSCs后能够稳定表达胰岛素基因，并分泌至细胞外持续3周以上，但对葡萄糖刺激无明显反应。结论 重组人胰岛素基因逆转病毒载体能够将胰岛素基因导入hMSCs并稳定表达。

    关键词：间充质干细胞；骨髓；逆转录病毒载体；基因治疗

    中图分类号：R459.9；R344.8；R587.1 文献标识码：A 文章编号：1673—0399(2006)02—0204—04

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