纹状体内微量灌注Tourette综合征患者血清对大鼠刻板行为的影响(2)
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1 对象和方法
1.1实验动物
7周龄Wistar 大鼠24只,雌雄各半,体重260 g~275 g,由山东大学动物实验中心提供。环境温度(21±1 )℃,12 h∶12 h的光/暗循环,自由采食及饮水。大鼠被随机分为对照组(微量注射正常儿童血清)及TS组(微量注射TS患者血清),每组大鼠雌雄比为1∶1。
1.2主要仪器
大鼠脑立体定向仪(Hamilton,美国),植入式微量渗透泵(Alzet,美国),5 μl微量注射器(Hamilton,美国),外科手术器械及手术用敷料(无锡医疗器械厂,中国)。
1.3血清标本收集及抗神经抗体检测
选取20名符合DSM-IV诊断标准的TS儿童和20名正常健康对照儿童。TS 儿童组中男14例,女6例,年龄范围7~13岁,平均年龄为(11.2±1.7)岁;以单纯TS组为病例对照组,其中男13例,女7例,年龄范围8~13岁,平均年龄为(11.7±2.1)岁。两组儿童均抽取静脉血2.5 mL,分离血清后做酶联免疫吸附实验,根据Singer等[7]的方法检测抗神经抗体滴度。取大鼠尾状核进行匀浆,12000 r/min离心30 min,最后用1 mL Tris提取缓冲液将沉淀重悬;取无菌的96孔ELISA平板,每孔加入150 μL 大鼠尾状核匀浆膜蛋白,4 ℃过夜;用含有0.05% Triton-X-100的PBS冲洗,加入15 %的小牛血清,37 ℃下放置2 h;洗板后加入1∶250稀释的待检血清,室温下放置90 min;加入二抗,兔抗人IgG按1∶5000稀释;TMB试剂盒检测抗原抗体反应;在OD=450 nm处读数 ......
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