冠心病患者焦虑情绪与APOE基因多态性(1)
【摘 要】目的:探讨冠心病(coronary heart disease,CHD)患者焦虑情绪与载脂蛋白 E(ApoE)基因多态性的关系。方法:对符合1979年世界卫生组织CHD诊断标准的107例冠心病患者,进行汉密顿焦虑量表(HamiltonAnxiety Scale,HAMA)、焦虑自评量表(Self-Rating Anxiety Scale,SAS)测评,依焦虑评分情况将患者分为CHD伴焦虑组(焦虑组)、CHD不伴焦虑组(无焦虑组),选择53例健康人为对照组。于入院2日内留存血样,以Hhal限制性内切酶酶切及琼脂糖凝胶电泳确定ApoE基因多态性,采用生物化学方法测定血清血脂。结果:焦虑组ε4等位基因频率高于无焦虑组和对照组(26.0% vs.10.4%,26.0% vs.13.6%;P=0.021,0.004)。焦虑组E4/4基因型频数高于无焦虑组(4 vs.0,P=0.032)。焦虑组E3/4基因型频数高于对照组(17 vs.8,P=0.018)。无焦虑组ε4等位基因频率高于对照组,但差异无统计学意义(13.6% vs.10.4%,P=0.802)。CHD组携带ε4等位基因患者HAMA[(13.2±5.2)vs.(9.2±6.5)]、SAS评分[(42.3±7.7)vs.(37.1±8.3)]及总胆固醇[(5.4±1.1)mmol/L vs.(4.8±1.3)mmol/L]、低密度脂蛋白水平[(3.6±1.0)mmol/L vs.(3.1±1.1)mmol/L]均高于非携带ε4等位基因者(P<0.05)。结论:冠心病患者的焦虑情绪可能与ApoE基因多态性具有一定关系。ApoE ε4等位基因可能是CHD患者焦虑情绪的危险因素。
, 百拇医药
【关键词】 焦虑;载脂蛋白基因;冠心病;病例对照研究
中图分类号:R749.4,R541.4 文献标识码:A 文章编号:1000-6729(2010)005-0329-05
doi:10.3969/j.issn.1000-6729.2010.05.003
随着现代分子生物学技术和分子流行病学的发展,从分子水平研究冠心病(coronary heart disease,CHD)的易感基因,已成为心血管病学研究的重要课题。载脂蛋白 E(ApoE)是脂蛋白的一种重要成分,研究证明ApoE基因是目前较为明确的CHD候选基因[1-4],冠心病患者中ε2/4、ε4/4基因型和ε4等位基因频率显著高于正常人[5]。本课题组先期的研究证明,CHD与负性情绪关系密切,CHD患者焦虑情绪的发生率高达60%~70%[6],且CHD焦虑障碍患者血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平显著高于无焦虑障碍患者[7-8]。有关抑郁与ApoE基因多态性的关系研究已有报告[8-11],而焦虑情绪与ApoE基因多态性的关系研究,从目前查到的文献看报告甚少。Mclachlan 等[12]研究发现,ApoE 基因缺失C57BL/6小鼠的焦虑水平比野生型C57BL/6小鼠低,提示ApoE 基因与焦虑的发生有关。本研究探讨CHD患者焦虑情绪与ApoE基因多态性的关系。
, 百拇医药
1 对象与方法
1.1对象
2008年5-10月在济宁医学院附属医院心血管内科住院的CHD患者,共107例,其中男性57例,女性50例。入组标准:(1)符合1979年世界卫生组织(WHO)的标准[13];(2)汉族,研究个体之间无血缘关系;(3)处于疾病的稳定期;(4)对本研究知情同意。排除标准:(1)严重肝肾功能损害;(2)未控制的糖尿病、内分泌功能失调、甲状腺疾病等影响血脂代谢的重大疾病;(3)各类精神障碍。
以汉密顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA-14)[14]214-215≥14分,或焦虑自评量表(Self-Rating Anxiety Scale,SAS)[14]213标准分≥50分作为是否存在焦虑情绪的标准,将CHD患者分为2组:CHD伴焦虑组(焦虑组),48例,其中男性26例[年龄38~76岁,平均(59.1±10.6)岁],女性22例[年龄39~74岁,平均(61.3±10.0)岁];CHD不伴焦虑组(无焦虑组),59例,其中男性31例[年龄36~78岁,平均(59.5±11.2)岁],女性28例[年龄41~76岁,平均( 63.0±10.9)岁]。
, 百拇医药
对照组来自本院健康体检人群,共53例,其中男性28例,女性25例。入组标准:(1)临床及实验室等检查无CHD客观证据;(2)无缺血性心脏病家族史;(3)无精神情绪障碍病史及家族史;(4)对本研究知情同意。年龄38~79岁,平均(57.5±9.1)岁。
三组对象年龄、性别差异无统计学意义(P﹥0.05)。本研究经过济宁医学院附属医院伦理委员会的审查批准,所有研究对象均签署书面知情同意书。
1.2方法
1.2.1 血液标本的采集
于入院2日内,空腹12 h后次日晨抽取外周静脉血5 mL,经EDTA抗凝,血样2 h内离心,取血浆进行血脂测定。血细胞成份贮存于-70 ℃,留做提取DNA用,集中进行ApoE基因多态性分析。
1.2.2 情绪的测量
, http://www.100md.com
血液标本采集的当日下午进行各个量表的测评。受试对象内在统一指导语的情况下,在安静的诊室或病房完成SAS、HAMA、SAS、SDS的测评。HAMA-14、HAMD-24由经过培训的心理医生进行测评,SAS、SDS为患者自评。
1.2.3 血脂的测定
采用酶法测定所有受试者总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),免疫法测定载脂蛋白A(apoA)、载脂蛋白B(apoB),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)采用Friedewald公式:TC-(HDL-C)-TG/2.2计算。
1.2.4DNA的提取
采用血液基因组DNA小量抽提试剂盒(上海生物工程技术服务有限公司)完成。步骤略。
1.2.5 多聚酶链反应扩增特异性载脂蛋白基因片段(PCR)
, 百拇医药
引物设计参考文献由上海生物工程技术公司提供[15]。上游引物5'-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3',下游引物5'-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3' 。ApoE 基因第 4 外显子区含编码 112 位与 158 位氨基酸的基因序列,扩增片段大小为 292 bp。
特异性扩增体系:采用同一公司生产的即用PCR扩增试剂盒。扩增反应体系为50 μL:模板 DNA(50~100ng )5 μL,dNTPs(10 mM)1 μL,10×PCR buffer 5 μL,上游引物(25pmol/μL)0.5 μL,下游引物(25pmol/μL)0.5 μL,Taq DNA 酶(2u/ μL)1 μL,ddH2O 33 μL,DMSO 4 μL。
PCR 反应条件: 置热循环仪中94 ℃预变性5 min,然后以下列程序进行30个循环:94 ℃变性1 min,65 ℃退火1 min,72 ℃延伸1 min。PCR产物置4 ℃保存。
PCR 产物检测:取10 μLPCR产物,采用 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。电压为 50 V,当溴酚兰迁移约 2 cm ~3 cm 左右,停止电泳。用上述引物可特异性扩增ApoE基因启动子区覆盖的一段长度为292 bp的DNA片断,将凝胶放在紫外仪下观察,若300 bp处出现特异荧光条带,则产物为目的基因片段,提示PCR扩增成功,紫外灯下拍照。结果1.2%琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳证实约300 bp处可见一清晰条带,表示PCR扩增成功。, 百拇医药(戚厚兴 冯学泉 张作记 张金国 谭洪勇 王春松)
, 百拇医药
【关键词】 焦虑;载脂蛋白基因;冠心病;病例对照研究
中图分类号:R749.4,R541.4 文献标识码:A 文章编号:1000-6729(2010)005-0329-05
doi:10.3969/j.issn.1000-6729.2010.05.003
随着现代分子生物学技术和分子流行病学的发展,从分子水平研究冠心病(coronary heart disease,CHD)的易感基因,已成为心血管病学研究的重要课题。载脂蛋白 E(ApoE)是脂蛋白的一种重要成分,研究证明ApoE基因是目前较为明确的CHD候选基因[1-4],冠心病患者中ε2/4、ε4/4基因型和ε4等位基因频率显著高于正常人[5]。本课题组先期的研究证明,CHD与负性情绪关系密切,CHD患者焦虑情绪的发生率高达60%~70%[6],且CHD焦虑障碍患者血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平显著高于无焦虑障碍患者[7-8]。有关抑郁与ApoE基因多态性的关系研究已有报告[8-11],而焦虑情绪与ApoE基因多态性的关系研究,从目前查到的文献看报告甚少。Mclachlan 等[12]研究发现,ApoE 基因缺失C57BL/6小鼠的焦虑水平比野生型C57BL/6小鼠低,提示ApoE 基因与焦虑的发生有关。本研究探讨CHD患者焦虑情绪与ApoE基因多态性的关系。
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1 对象与方法
1.1对象
2008年5-10月在济宁医学院附属医院心血管内科住院的CHD患者,共107例,其中男性57例,女性50例。入组标准:(1)符合1979年世界卫生组织(WHO)的标准[13];(2)汉族,研究个体之间无血缘关系;(3)处于疾病的稳定期;(4)对本研究知情同意。排除标准:(1)严重肝肾功能损害;(2)未控制的糖尿病、内分泌功能失调、甲状腺疾病等影响血脂代谢的重大疾病;(3)各类精神障碍。
以汉密顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA-14)[14]214-215≥14分,或焦虑自评量表(Self-Rating Anxiety Scale,SAS)[14]213标准分≥50分作为是否存在焦虑情绪的标准,将CHD患者分为2组:CHD伴焦虑组(焦虑组),48例,其中男性26例[年龄38~76岁,平均(59.1±10.6)岁],女性22例[年龄39~74岁,平均(61.3±10.0)岁];CHD不伴焦虑组(无焦虑组),59例,其中男性31例[年龄36~78岁,平均(59.5±11.2)岁],女性28例[年龄41~76岁,平均( 63.0±10.9)岁]。
, 百拇医药
对照组来自本院健康体检人群,共53例,其中男性28例,女性25例。入组标准:(1)临床及实验室等检查无CHD客观证据;(2)无缺血性心脏病家族史;(3)无精神情绪障碍病史及家族史;(4)对本研究知情同意。年龄38~79岁,平均(57.5±9.1)岁。
三组对象年龄、性别差异无统计学意义(P﹥0.05)。本研究经过济宁医学院附属医院伦理委员会的审查批准,所有研究对象均签署书面知情同意书。
1.2方法
1.2.1 血液标本的采集
于入院2日内,空腹12 h后次日晨抽取外周静脉血5 mL,经EDTA抗凝,血样2 h内离心,取血浆进行血脂测定。血细胞成份贮存于-70 ℃,留做提取DNA用,集中进行ApoE基因多态性分析。
1.2.2 情绪的测量
, http://www.100md.com
血液标本采集的当日下午进行各个量表的测评。受试对象内在统一指导语的情况下,在安静的诊室或病房完成SAS、HAMA、SAS、SDS的测评。HAMA-14、HAMD-24由经过培训的心理医生进行测评,SAS、SDS为患者自评。
1.2.3 血脂的测定
采用酶法测定所有受试者总甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),免疫法测定载脂蛋白A(apoA)、载脂蛋白B(apoB),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)采用Friedewald公式:TC-(HDL-C)-TG/2.2计算。
1.2.4DNA的提取
采用血液基因组DNA小量抽提试剂盒(上海生物工程技术服务有限公司)完成。步骤略。
1.2.5 多聚酶链反应扩增特异性载脂蛋白基因片段(PCR)
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引物设计参考文献由上海生物工程技术公司提供[15]。上游引物5'-AACAACTGACCCCGGTGGCG-3',下游引物5'-ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC-3' 。ApoE 基因第 4 外显子区含编码 112 位与 158 位氨基酸的基因序列,扩增片段大小为 292 bp。
特异性扩增体系:采用同一公司生产的即用PCR扩增试剂盒。扩增反应体系为50 μL:模板 DNA(50~100ng )5 μL,dNTPs(10 mM)1 μL,10×PCR buffer 5 μL,上游引物(25pmol/μL)0.5 μL,下游引物(25pmol/μL)0.5 μL,Taq DNA 酶(2u/ μL)1 μL,ddH2O 33 μL,DMSO 4 μL。
PCR 反应条件: 置热循环仪中94 ℃预变性5 min,然后以下列程序进行30个循环:94 ℃变性1 min,65 ℃退火1 min,72 ℃延伸1 min。PCR产物置4 ℃保存。
PCR 产物检测:取10 μLPCR产物,采用 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。电压为 50 V,当溴酚兰迁移约 2 cm ~3 cm 左右,停止电泳。用上述引物可特异性扩增ApoE基因启动子区覆盖的一段长度为292 bp的DNA片断,将凝胶放在紫外仪下观察,若300 bp处出现特异荧光条带,则产物为目的基因片段,提示PCR扩增成功,紫外灯下拍照。结果1.2%琼脂糖凝胶(溴化乙锭染色)电泳证实约300 bp处可见一清晰条带,表示PCR扩增成功。, 百拇医药(戚厚兴 冯学泉 张作记 张金国 谭洪勇 王春松)