王 杨，高 辉，黄云昆，付晓野，徐 敏(昆明市延安医院检验科，昆明市 650051)

    铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)广泛分布于自然界，属于条件致病菌，在正常人体内很少致病，却是医院感染的重要病原菌之一。随着新型广谱抗菌药物的广泛应用，PA对β-内酰胺类抗菌药物的耐药性日益严重，限制了抗菌药物的选择，给临床抗感染治疗带来了极大的困扰。本研究收集我院临床标本中分离的26株PA，通过研究其所产β-内酰胺酶的基因型及耐药性特点，为进一步研究昆明地区PA耐药基因的分布情况奠定基础，为减少耐药PA的产生、提高临床抗感染治疗效果提供科学依据。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    VITEK32型全自动细菌鉴定仪(法国生物梅里埃公司)；聚合酶链反应(PCR)仪(德国Biometra公司)；PowerPac Basic电泳仪和Laboratovies 6000凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 菌株

    2009年6月-2009年12月我院检验科临床标本中分离的非重复性PA26株；质控菌：大肠埃希菌(ATCC25922)和铜绿假单胞菌(ATCC27853)均由云南省临检中心提供。

    1.3 试药

    药敏试验用M-H培养基和亚胺培南、环丙沙星药敏纸片均为英国Oxoid公司产品；哌拉西林、氨曲南、头孢他啶、头孢哌酮、头孢吡肟、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素、阿米卡星、奈替米星、妥布霉素、复方磺胺甲唑(复方新诺明)、左旋氧氟沙星药敏纸片均为北京天坛药物生物技术开发公司产品；细菌基因组提取试剂盒(天根生化科技(北京)有限公司)；基因扩增试剂盒(Taq PCR MasterMix)(北京博迈德科技发展有限公司)；PCR扩增引物(北京百泰克生物技术有限公司合成) ......