盛芝娜，潘怡娜，魏晓慧，徐宇虹(上海交通大学药学院，上海市200240)

    基因治疗(Gene therapy)和基因输送(Gene delivery)是20世纪的新兴研究领域，自1992年Stribling等[1]首次证明呼吸道基因给药的可行性以来，已经被逐渐应用于多种呼吸道局部及全身性疾病的治疗中，如肺部囊性纤维化、肺癌、哮喘等[2～4]。已报道[5]的基因呼吸道给药方式主要有滴鼻给药、气道插管给药、雾化吸入给药等，但适用于耐压定量气雾(pMDI)装置的基因给药制剂还未见文献报道。pMDI是吸入给药装置的一种，要求将药物与适宜的抛射剂混合装于具有特制阀门系统的耐压容器中，使用时借助抛射剂的压力将内容物呈雾状喷出，患者配合呼吸主动吸入。pMDI气雾剂的主要特点是在呼吸道分布广泛且均匀，给药剂量准确，同时携带、使用也很方便。

    制备适用于pMDI装置的基因给药制剂所面临的最大挑战是：常用的基因载体都是水溶性，无法与抛射剂、助溶剂互溶灌装成气雾剂使用，因此研制出疏水性的基因载体是当务之急。本文根据Bligh and Dyer萃取原理[6]，改良后发展了一种新的阳离子脂质/DNA复合物的制备方法，对制得的载体系统进行了表征，并初步评价了灌装后的气雾剂的毒性及细胞转染效率。

    1 仪器与材料

    1.1 仪器

    Laborota 4000旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)；Zetasizer Nano ZS90激光粒度分布仪(英国Malvern公司)；UV-21.2PC紫外分光光度计(美国Unico公司)；多功能酶标仪(美国Bio-Rad公司)；单管式化学发光分析仪(德国Berthold公司)；BCM-100生物洁净工作台(苏州净化设备有限公司)；气雾罐、定量阀及触动器(苏州万通Aptar定量阀系统有限公司)；气雾灌装机(上海华新气雾剂有限公司)。

    1.2 试药

    阳离子脂质 DOTAP(1，2-dioleoyl-3-trimethyl-ammonium-propane，美国Sigma公司，批号：086K5200，纯度：>99%)；荧光素酶质粒pGL3-Control、荧光素酶检测底物及细胞裂解液(美国Promega公司)；氟利昂F12(瑞丽气体有限公司)；RPM I 1640培养基、胎牛血清(FBS)(美国Gibco公司)；MTT(北京博大泰克生物基因技术有限责任公司)；三氯甲烷、甲醇、异丙醇、无水乙醚、二甲亚砜等试剂均为分析纯 ......