朴丽花，蔡英兰，张默函，姜京植，金政#，许祖德(.延边大学组织胚胎学教研室，吉林延吉33000；2.复旦大学附属华山医院病理科，上海 200040)

    人参皂苷Rh2(Gensenoside Rh2)是从人参中提取的天然活性成分，分子式为C36H62O8H2O，分子质量622，化学名为20(S)-人参二醇-3-氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，以往研究已经证实了它能在多个环节上抑制多种肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡等[1-3]。在对阿霉素(ADM)的前期试验中也发现人参皂苷Rh2能显著增强人乳腺癌MCF7/Adr细胞对ADM的敏感性，提高ADM在细胞内的聚积，同时人参皂苷Rh2也能明显抑制ADM对细胞P-糖蛋白(P-gp)水平的上调，从而证实人参皂苷Rh2确实具有耐药逆转作用[4]。近年来研究显示，磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路参与并促进了肿瘤的侵袭与转移。联合治疗已成为当今抗肿瘤研究的重要手段[5-6]，两种药物协同作用有助于放大较弱的细胞信号。因此，本研究中笔者用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002联合人参皂苷Rh2处理MCF7/Adr细胞，以观察其对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。

    1 材料

    1.1 仪器

    PROTEAN3型垂直式电泳仪、SD型半干转印槽(美国Bio-Rad公司)；Avanti30型低温高速离心机(美国Beckman Coulter公司)；Vmax型酶标仪(美国Molecular Device公司)；TS100型倒置显微镜(日本Nikon公司)。

    1.2 药品与试剂

    人参皂苷Rh2(上海融禾医药科技发展有限公司，纯度：>98%)；DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶(美国Invitrogen公司)；MTT、鼠抗β-actin单克隆抗体(美国Sigma公司)；基底膜、Transwell室(美国BD公司)；LY294002(美国Alexis Biochemicals公司)；兔抗基质金属蛋白酶(MMP)2多抗、AKT、磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)；鼠抗P-gp单克隆抗体(德国Calbiochem公司)；二抗羊抗兔、羊抗鼠(美国Rockland公司)。

    1.3 细胞株

    人乳腺癌MCF7/Adr细胞株购自中国科学院上海细胞研究所。

    2 方法

    2.1 细胞培养

    MCF7/Adr细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基置于37℃、5%CO2、95%空气饱和湿度培养箱培养 ......