2.6 ELISA法检测肺组织中ERK、p-ERK、p38 MAPK、p-p38 MAPK活性

    取约1/3右肺组织，剪碎匀浆，按照相应试剂盒说明书操作，检测肺组织中ERK、p-ERK、p38 MAPK、p-p38 MAPK的活性，每份样品检测5次。

    2.7 Western blot法检测肺组织中ERK、p-ERK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达

    取约1/3右肺组织，剪碎匀浆后，加入适量RIPA裂解液，冰上溶胀10 min，然后在4 ℃条件下15 000 r/min(离心半径9.5 cm)离心15 min，收集上清液，二喹啉甲酸(BCA)法测定总蛋白浓度。取30 ?g蛋白上样后行10%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)。电泳完成后，电转至0.45 ?m的聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，5%脱脂奶粉封闭1 h。分别加入相应一抗(1 ∶ 1 000)孵育1 h。PBST洗涤后，加入辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠IgG二抗(1 ∶ 2 000)孵育1 h。ECL化学发光试剂显色，以β-actin为内参，采用Bio-Rad凝胶成像系统对各组条带灰度值进行分析，以目标蛋白条带灰度值与内参条带灰度值的比值表示目标蛋白的相对表达水平 ......