2.4 ELISA法检测细胞中TNF-α和IL-6蛋白表达

    细胞培养、分组及预处理同“2.3”，预处理细胞2 h后，加入1.0 μg/mL的LPS共同孵育24 h，收集细胞上清液。分别按鼠源TNF-α、IL-6 ELISA试剂盒要求操作，检测细胞中TNF-α和IL-6蛋白表达水平。

    2.5 Western blot法检测细胞中NF-κB p65蛋白表达

    细胞培养、分组及预处理同“2.3”，预处理细胞2 h后，加入1.0 μg/mL的LPS共同孵育1 h，收集细胞，提取蛋白并进行蛋白含量测定[5]，行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后，将凝胶上的蛋白带转移到硝酸纤维素膜，5%脱脂乳封闭1.5 h后，洗膜3次，置于鼠源NF-κB p65抗体工作液(稀释比例1 ∶ 1 000)中孵育过夜，洗膜3次，置于HRP标记二抗工作液(稀释比例1 ∶ 2 000)中室温振荡孵育1.5 h，洗膜3次，超敏发光液显光，暗室内曝光显影、定影。用凝胶成像系统扫描、分析蛋白条带，以目标蛋白的灰度值与内参β-actin灰度值的比值计算相对表达量 ......