2.5 细胞培养液中HYP含量检测

    将2～3代CFs接种于6孔板中，待细胞贴壁长至70%密度时，更换为不含血清的DMEM培养基饥饿处理24 h，然后按“2.4”项下方法分组、加药，将细胞置于37 ℃、5%CO2恒温培养箱中继续培养48 h后，移液器取细胞培养液500 μL，按照试剂盒说明书操作检测细胞培养液中HYP含量。

    2.6 细胞中ERK1/2、p38 MAPK、p-ERK1/2、p-p38 MAPK蛋白表达水平测定

    取细胞按“2.5”项下方法分组，加入相应浓度SCU处理细胞2 h后，加入Ang Ⅱ处理20 min，然后加入适量的蛋白裂解液冰上裂解细胞，提取总蛋白和磷酸化蛋白，二喹啉甲酸(BCA)法进行蛋白定量。取总蛋白依次经聚丙烯酰氨凝胶电泳、转膜、封闭等步骤后，加入ERK1/2(1 ∶ 1 000)、p-ERK1/2(1 ∶ 1 000)、p38 MAPK(1 ∶ 1 000)、p-p38 MAPK(1 ∶ 1 000)和GAPDH(1 ∶ 5 000)一抗 ...... 濠碘€冲€归悘澶愬箖閵娿儲韬ù锝堟硶閺併倝骞嶇€ｎ偅绨氱紒娑橆槹缁侊妇鎲撮崼鐔割槯闁哄啰濮电涵鍫曞蓟閵壯勭畽闁瑰瓨鐗旂粭鍛姜閽樺寮块柡鍌氭祫缁辨繈宕ｉ婵嗗幋闁哄嫷鍨甸～锕傚箹濠婂懎鍋嶇€殿喗娲橀幖鍛婂緞鏉堚晜鍩傞柍銉︾矎濞村棝鎯嶆担娴嬪亾濠垫挾绀夐悹鍥棑閸嬶綁宕欑拠鑼綄妤犵偞娲樺〒鑸电▔鐎ｎ偅鐓欓柣銊ュ閳ь剚绮庨弫鎼佹嚇閹寸姴顣奸柍銉︾箖閸ㄣ劑鍨惧⿰鍐ㄦ枾缂傚啯鍨块妴澶愬灳濠靛⿴鍟忛梻鍌ゅ枔閳ь剨鎷�


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