姜黄素对体内外骨肉瘤细胞增殖和侵袭的影响及其机制研究(3)
2.3.2 过表达miR-21对姜黄素抑制人骨肉瘤细胞增殖的影响 取对数生长期U-2OS、MG-63细胞,分别以1×104 个/孔接种于96孔板中,培养12 h后,按“2.1”项下对照组、姜黄素高浓度+agomiR-21 NC组、姜黄素高浓度+ agomiR-21组加药,每组3个复孔,作用48 h后,每孔加入10 μL CCK-8试剂,37 ℃孵育2 h,使用酶标仪在450 nm波长处测定细胞的OD值。2.4 Transwell小室法检测细胞侵袭能力
取U-2OS、MG-63细胞,按“2.1”项下分组加药,作用24 h后,将各组细胞分别接种于底膜基质胶预铺的24孔板Transwell小室中,上室接种无血清培养基配制的细胞悬液200 ?L(约1×105个/孔),下室加入含10% 胎牛血清的培养基,37 ℃培养箱中孵育48 h,取出小室用棉签擦去上室内的基质胶和细胞,4%多聚甲醛固定10~30 min后,磷酸盐缓冲液(PBS)洗细胞3次,再用0.1%结晶紫染色20 min ......
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