2.6 血清中TNF-α、IL-6含量测定

    末次给药结束2 h后，每组取10只大鼠，收集大鼠血液，将血液以1 500×g离心10 min，收集上清液。按照相应试剂盒说明书操作，测定各组大鼠血清中TNF-α和IL-6含量。

    2.7 创面组织中NF-κB p65、p-I-κB蛋白表达测定

    将大鼠取血后处死，取50 mg皮肤组织，加入组织蛋白匀浆液500 μL，匀浆至无组织块，冰浴15 min，在4 ℃条件下以1 500×g离心5 min，收集上清。然后按照说明书要求，加入细胞浆蛋白提取液，冰浴10～15 min，以 10 000×g离心10 min，收集上清液，即为细胞浆蛋白样品液。沉淀中加入細胞核蛋白提取液，冰浴10～15 min，以10 000×g离心10 min后，收集上清液，即为细胞核蛋白样品液。用二喹啉甲酸(BCA)法对细胞浆和细胞核蛋白进行定量，然后置于-70 ℃保存，备用。蛋白变性后，分别取等量蛋白(30 μg)上样，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，半干转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，脱脂奶粉封闭后，用一抗(NF- κB p65、I-κB)孵育过夜，洗膜缓冲液TBST漂洗3遍后，加入羊抗兔二抗(1 ∶ 5 000) ......