3.2 前处理方法及色谱、质谱条件优化

    本法进样量少(3 μL)，且分析时间短(3.1 min)，优于现有文献报道[7-10]，能满足临床大样本同时检测的需求。与液-液萃取法或固相萃取法比较，本法所采用的乙腈沉淀蛋白前处理方法具有简便易行、操作快速的特点，可显著提高分析效率[14]。

    在色谱条件优化方面，本课题组前期考察了乙腈、0.1%甲酸溶液-甲醇、水-乙腈等流动相体系的分离效果。有研究指出，在ESI+检测模式下，在水相中加入酸性溶剂，可有助于增强化合物的离子化效率，提高检测灵敏度，并有助于改善色谱峰峰形[15-16]。前期预试验结果也显示，以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱时，可获得良好的峰形及较快的分析速度，故最终以此作为色谱流动相。

    在质谱条件优化方面，本课题组前期分别考察了氟康唑m/z 307.1→220.0、m/z 307.1→238.1以及内标m/z 311.1→223.0、m/z 311.1→242.1等不同离子对在质谱系统中的响应，并对其DP、CE进行了调谐。结果显示，氟康唑-d4的[M+H]+ m/z 311.1比氟康唑的[M+H]+ m/z 307.1多4(4个氘原子) ......