骆驼刺正丁醇萃取部位中单体化合物的分离纯化及其对人宫颈癌HeLa细胞的影响研究(3)
2.2 结构鉴定结合熔点等理化性质,采用质谱(MS)、氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)、红外(IR)等波谱手段对化合物Ⅰ~Ⅵ进行结构鉴定。
2.3 抗HeLa细胞增殖活性单体的筛选
2.3.1 细胞培养 将HeLa细胞从液氮中取出,迅速置于37 ℃水浴锅中解冻,取适量至离心管中,加入细胞培养液(含10%FBS的DMEM高糖培养基,下同)3 mL,以1 000 r/min离心5 min后,弃去上清液,将沉淀重悬于细胞培养液1 mL中,并转移至细胞培养瓶内,加入细胞培养液5 mL,混匀,置于37 ℃、5%CO2细胞培养箱中进行培养;每2天更换细胞培养液1次,并于显微镜下观察细胞形态,备用[12-14]。
2.3.2 活性单体筛选 取“2.3.1”项下对数生长期的HeLa细胞,用0.25%胰蛋白酶消化后制成单细胞悬液并计数。用细胞培养液将细胞密度调整至6×104个/mL,按100 ?L/孔接种至96孔板中 ......
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