2.3 免疫组织化学法检测各组小鼠中脑黑质中多巴胺能神经元损伤情况

    按“2.1”项下方法分组、造模与给药，每组3只。末次给药后，以10%水合氯醛(2.5 mL/kg)进行麻醉，于左心室依次灌注生理盐水15 mL和4 ℃的4%多聚甲醛溶液15 mL后，断头取脑。脑组织置于4 ℃的4%多聚甲醛溶液中固定过夜，随后依次转移至10%蔗糖溶液、30%蔗糖溶液中，直至下沉。脑组织经石蜡包埋后，于中脑黑质部位行冠状连续切片(厚度约为20 μm)，切片于室温下用3%过氧化氢处理10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，随后用PBS清洗5 min×3次，再置于封闭液(含0.2%Triton X-100溶液和10%山羊血清，以PBS为溶剂)中封闭1 h后，加入TH抗体(1 ∶ 4 000)，于4 ℃孵育过夜；用PBS清洗后，加入生物素标记二抗(1 ∶ 1 000)，于室温下孵育30 min，用ABC试剂盒按其说明书进行染色，以DAB显色、苏木精复染；经乙醇梯度脱水后，以中性树脂封片，置于倒置荧光显微镜下观察 ......