岗梅根和茎超临界CO2萃取物中低极性挥发性成分比较及其对IEC—6细胞增殖活性的影响(3)
2.3.2 萃取物对细胞增殖活性的影响考察 采用MTT法进行检测。取对数生长期细胞进行消化计数,然后按1×104个/孔接种于96孔板,在37 ℃、5%CO2条件下培养24 h。将细胞分为空白对照组和给药组,每组平行设置3个孔。吸弃各孔中的完全培养液,空白对照组加入含0.4%DMSO+10%FBS的DMEM培养基200 μL,给药组加入含梯度质量浓度的岗梅根或茎萃取物(终质量浓度分别为0、1、5、10、20、40、60、80、100 μg/mL,按浸膏质量计算,剂量根据预试验结果制定)的完全培养液200 μL,在37 ℃、5%CO2条件下培养24 h。培养完毕后,每孔加入0.5 mg/mL MTT溶液(以PBS为溶剂配制)20 μL,继续培养4 h后吸弃培养基,每孔加入DMSO 150 μL,振荡10 min。采用酶标仪在490 nm波长处检测各孔吸光度(OD)值,以此表示细胞相对活力;同时,以药物浓度对数值为横坐标、相对细胞活力为纵坐标,采用GraphPad Prism软件绘制细胞增殖曲线并计算各萃取物的半数有效浓度(EC50) ......
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