双参饮对肝纤维化模型大鼠的改善作用及机制研究(3)
2.3 大鼠肝脏组织病理学观察各组大鼠取肝相同部位组织,在10%的甲醛中固定24 h,脱水,石蜡包埋,切片(厚度:6 μm),进行HE或VG染色,在显微镜下观察肝细胞炎症程度及纤维化改变等情况。
2.4 大鼠肝组织中SOD、MDA、HYP水平检测
采用分光光度法检测。取“2.3”项下部分肝组织,按9倍质量比加入冰生理盐水碾磨制成组织匀浆,以3 000 r/min离心5 min,取上清液,按相应试剂盒说明书步骤操作,检测SOD、MDA、HYP水平。
2.5 大鼠肝组织中α-SMA蛋白表达水平检测
采用免疫组化法检测。取“2.3”项下制作的石蜡切片,脱蜡,抗原修复,滴加兔α-SMA多克隆抗体(1 ∶ 800)后,置于孵育盒中于4 ℃孵育18~24 h;PBS洗涤2 min×3次,按NovoLink聚合物检测系统RE7159试剂盒说明书操作步骤进行染色处理后,于显微镜下观察每个视野中阳性染色情况(即镜下呈棕褐色颗粒者);同时,采用Image Pro Plus 6.0软件分析阳性染色部分的光密度值(OD),用来表示α-SMA蛋白表达水平。
2.6 统计学方法
采用SPSS 19.0统计软件对实验数据进行处理 ......
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